細胞名稱：293(HEK-293)人胚腎細胞

組織來源：腎；以腺病毒5 DNA 進行轉化

培養條件：DMEM +10% FBS；37℃，5% CO2

形       態：貼壁；上皮細胞樣

293(HEK-293)人胚腎細胞背       景：293細胞是剪切過的人腺病毒5(Ad5)轉染的人胚腎細胞形成的永生化細胞。 此細胞包含并表達轉染的Ad5基因。早期報道中指出該細胞基因組中含有腺病毒5（Ad5）基因組的左側端和右側端的DNA，但是現在明確了只存在其左側端的DNA。經過對Ad5的插入點的克隆測序發現，Ad5的1～4344位線性核苷酸整合入細胞染色體19q13.2。該細胞為人類腺病毒載體擴增的宿主。可表達異常的玻連蛋白的細胞表面受體，由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。 需在生物**2級實驗室操作。

運輸和保存：使用含有上等胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養基后轉移至10cm培養皿或者T75培養瓶中培養，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

細胞用途：僅供科研使用。                      

293(HEK-293)人胚腎細胞培養步驟

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備DMEM-H培養基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；上等胎牛血清，10%。也可根據實驗需要選擇懸浮培養基，使293T細胞懸浮生長。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%完全培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。**天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

293(HEK-293)人胚腎細胞對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3.按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

293(HEK-293)人胚腎細胞注意事項：

1. 收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物**臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要**后方能丟棄。